Приготовление среды Мюллера:
Приготовление раствора серноватистокислого натрия. В мерный цилиндр с 50 г тиосульфата натрия добавляют дистиллированную воду до метки 100 см. Полученный раствор стерилизуют однократно в аппарате Коха 20 мин.
Приготовление раствора Люголя. В 100 см стерильной дистиллированной воды растворяют 25 г кристаллического йода и 20 г йодистого калия.
В стерильную колбу помещают 4,5 г х.ч. мела и стерилизуют сухим жаром при температуре 150 °С в течение 15 мин, наливают 90 см мясо-пептонного бульона (по п.3.8), стерилизуют в течение 30 мин при давлении 10 Па. В колбу с мясо-пептонным бульоном и мелом стерильно добавляют 2 см раствора Люголя и 10 см раствора серноватистокислого натрия, взбалтывают.
Приготовление среды Кауфмана: В 100 см стерильной среды Мюллера, приготовленной по п.3.15, стерильно добавляют 1 см водного раствора 1 г/дм бриллиантовой зелени и 5 см стерильной желчи крупного рогатого скота. Смесь хорошо взбалтывают (не стерилизуют).
Приготовление среды Гиса:
Для приготовления индикатора Андреде в 100 см дистиллированной воды растворяют 18,4 см 1 моль/дм раствора гидроокиси натрия и 0,3 г кислого фуксина. Раствор стерилизуют 5 мин при давлении 5·10 Па и хранят в темноте.
В 100 см дистиллированной воды растворяют 1 г пептона и 0,5 г хлористого натрия при нагревании. Затем фильтруют до тех пор, пока раствор не станет совершенно прозрачным.
В фильтрате устанавливают рН 7,0, прибавляют 0,5 г углевода, а затем 1 см индикатора Андреде. Полученную смесь разливают в пробирки с поплавками по 5 см и стерилизуют 20 мин при давлении 5·10 Па.
Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета, без розового оттенка.
Допускается использовать готовые среды Гисса - сухой препарат с индикатором "ВР" и маннитом, лактозой, сахарозой, глюкозой.
Среду Плоскирева приготавливают из сухой готовой среды.
Среду Левина приготавливают из сухой готовой среды.
Среду висмут-сульфит-агар приготавливают из сухой готовой среды.
Приготовление хлористомагниевой среды "М" (модифицированной): Среда состоит из трех растворов А, В и С.
Приготовление дрожжевого экстракта: В 2 дм дистиллированной воды растворяют 1 кг прессованных хлебопекарных дрожжей. Полученную суспензию стерилизуют 30 мин текучим паром, затем отстаивают в холодильнике при температуре 4-6 °С в течение 5-6 сут.
Жидкость над осадком декантируют, приливают 2,5 см 0,01%-ного раствора кристалл-виолета, разливают во флаконы или пробирки и вновь стерилизуют при температуре 100 °С в течение 30 мин.
Экстракт хранят в холодильнике при температуре 4-6 °С в течение двух недель со дня приготовления.
Для приготовления раствора А в 90 см дистиллированной воды растворяют 0,42 г пептона, 0,7 г хлористого натрия, 0,15 г однозамещенного фосфорнокислого натрия, 2 см дрожжевого диализата. (При отсутствии дрожжевого диализата допускается заменять его дрожжевым экстрактом).
Для приготовления раствора В в 9 см дистиллированной воды растворяют 3,6 г кристаллического хлористого магния.
Раствор С состоит из 0,09 см водного раствора 50 г/дм бриллиантовой зелени.
Для приготовления хлористомагниевой среды "М" (модифицированной) растворы А, В и С смешивают и стерилизуют 30 мин при давлении 5·10 Па.
Приготовление среды Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука: В 1 дм дистиллированной воды растворяют 1 г гипосульфита, 0,6 г соли Мора, 10 г мочевины, 15 г лактозы х.ч., 3,5 г сахарозы и 2 г глюкозы. Устанавливают рН среды до 7,4-7,6. Добавляют 46 г сухой среды с сахарозой и индикатором ВР. Все размешивают, кипятят в водяной бане в течение 40 мин. Разливают в пробирки по 5-6 см. Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют 20 мин при давлении 5·10 Па. После стерилизации среду скашивают так, чтобы в пробирке остался столбик высотой не менее 3 см.
Приготовление агара с бриллиантовым, зеленым и феноловым красным (БФА)
Для приготовления растворов красок: 0,5 г бриллиантового зеленого растворяют в 100 см дистиллированной воды;
0,4 фенолового красного, 16 см 0,1 моль/дм гидроокиси натрия - в 184 см дистиллированной воды.
Оба приготовленных раствора в плотно закрытых флаконах выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение суток. Небольшим нерастворившимся осадком можно пренебречь.
Для приготовления смеси красок в 200 см раствор фенолового красного добавляют 5 см бриллиантового зеленого. Смесь хранят в холодильнике. Срок хранения смеси не ограничен.
В 1 дм дистиллированной воды вносят 50 г сухого питательного агара, 10 г лактозы, 40 см 0,1 моль/дм соляной кислоты.
Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин, затем в кипящей водяной бане не менее 1 ч, после чего на открытом огне (электроплитке) в течение 3-5 мин, фильтруют через вату (небольшой мутностью можно пренебречь).
Смесь разливают во флаконы, стерилизуют при давлении 5·10 Па в течение 30 мин и хранят в холодильнике до месяца со дня приготовления.
В 100 см среды с агаровой основой, предварительно расплавленной и охлажденной до 45 °С, вносят 4,1 см смеси красок. Среду разливают по чашкам Петри. Среда имеет цвет бутылочного стекла - зеленовато-желтый.
Приготовление молочно-солевого агара
Для приготовления солевого мясо-пептонного агара 65 г/дм в 1 дм расплавленного мясо-пептонното агара (пп.3.4; 3.5) добавляют 65 г х.ч. хлористого натрия. Устанавливают рН-7,4. Стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при давлении 10 Па.
В 100 см расплавленного и охлажденного солевого агара до 45 °С (п.3.24.1) добавляют 10 см стерильного обезжиренного молока, разливают по чашкам Петри. Среду хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение недели со дня приготовления.
Приготовление желточно-солевого агара (среды Чистович): Для приготовления желточного раствора в 200 см стерильного физиологического раствора добавляют стерильно один яичный желток и раствор взбалтывают. Раствор хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение одной недели со дня приготовления.
В 150 см расплавленного и охлажденного до 45 °С солевого агара 65 г/дм (п.3.24.1) стерильно добавляют 50 см желточного раствора, взбалтывают и разливают по чашкам Петри. Среду хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение недели со дня приготовления.
Приготовление нитратной плазмы: К 8 см свежей крови кролика добавляют стерильно 2 см лимоннокислого натрия 50 г/дм и отстаивают в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение суток.
Допускается использовать готовую сухую цитратную плазму.
Приготовление бульона Вайнберга:
Приготовление мясной воды из сердца крупного рогатого скота: В 1 дм водопроводной воды добавляют 1 кг сердца крупного рогатого скота, пропущенного через мясорубку. Медленно нагревают до кипения, кипятят 20 мин, охлаждают, снимают жир, фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Приготовление пепсин-пептонной воды: В 4 дм водопроводной воды добавляют 400 г измельченной свежей печени крупного рогатого скота, 400 г измельченных свиных желудков, 40 г соляной кислоты (плотностью 1,19 г/см), перемешивают, подогревают до 50 °С и оставляют при комнатной температуре на 18-24 ч. Затем кипятят в течение 10 мин, декантируют (осаждают), фильтруют, добавляют 8 г двузамещенного фосфорнокислого натрия, устанавливают рН 7,4.
Смешивают 1 дм мясной воды из сердца крупного рогатого скота и 2 дм пепсин-пептонной воды, устанавливают рН 7,8-8,2, разливают по колбам и стерилизуют 10 мин при давлении 10 Па.
Приготовление сухой среды КПД (кито-пептоно-дрожжевой): В 1 дм теплой дистиллированной воды добавляют 65 г сухого порошка КПД. Устанавливают рН 7,8-8,0 и разливают в стерильную посуду с ватой. Стерилизуют 30 мин при давлении 5·10 Па.
Приготовление циклосериновой среды (СЦС): В 1 дм питательной основы (бульон Хоттингера п.3.7, бульон Вайнберга п.3.27, сухая кито-пептоно-дрожжевая п.3.28) добавляют последовательно 5 см раствора 100 г/дм сернокислого железа, 10 см раствора 100 г/дм сульфита натрия (кристаллического) и 40 см раствора 10 г/дм Д-циклосерина. Все перечисленные компоненты готовят отдельно на стерильной дистиллированной воде. Не следует их смешивать вместе перед добавлением к основе, так как может образоваться осадок.
Среду хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С не более недели со дня приготовления.
Приготовление среды Вильсон-Блера: Раствор хлористого железа готовят на стерильной дистиллированной воде; раствор сернистокислого натрия стерилизуют в течение 1 ч текучим паром.
К 100 см расплавленного и охлажденного до температуры 80 °С мясо-пептонного агара, приготовленного по п.3.4 или 3.5, добавляют 1 г глюкозы (рН не ниже 7,2), 10 см раствора 200 г/дм сернистокислого натрия и 1 см раствора 80 г/дм хлористого железа. Смесь разливают в стерильные пробирки столбиком высотой по 10 см.
Приготовление мясной воды: В 1 кг мясного фарша, приготовленного из говядины высшего сорта, заливают 2 дм водопроводной воды и настаивают в холодильнике 24 ч; затем кипятят в течение 30 мин при постоянном помешивании и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К полученному фильтрату добавляют воду до первоначального уровня.
Режим стерилизации 20 мин при давлении 10 Па.
Приготовление мясо-пептонного бульона (МПБ) из мясной воды: В 1 дм мясной воды добавляют 10 г пептона из 5 г хлористого натрия. Затем устанавливают рН 7,3-7,4, кипятят в течение 20 мин и фильтруют. Раствор стерилизуют 20 мин при давлении 10 Па.
Подготовка проб
В зависимости от вида продукта объединенную пробу массой 50 г составляют из точечных проб следующим образом: колбасные изделия в оболочке и продукты из свинины, баранины и говядины помещают в металлический или эмалированный тазик (тарелку), тщательно протирают ватным тампоном, смоченным спиртом, и дважды обжигают над пламенем (спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962).
Затем батоны разрезают продольно стерильным (фламбированным) ножом или скальпелем на две половинки, не рассекая оболочку противоположной стороны батона. Пробу отбирают из нескольких участков центральной части и из-под оболочки обеих половинок батона;
из свиных, бараньих, говяжьих продуктов на костях и из бекона пробы вырезают стерильным инструментом из различных участков обожженного образца на глубине 2-3 см от поверхности, предпочтительно ближе к кости;
изделия без оболочки (мясные хлебы, паштеты, студни и другие изделия) исследуют с поверхности и в глубине продукта.
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15
